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本來只想簡單推個文就好的，不知不覺愈打愈多就乾脆整理整理打完整一點發個一篇好了
，順便解釋一下前陣子大家鬧得沸沸揚揚的機器問題。


1. 名詞解釋

 1.4 定量(Quantitative)：藉由與標準品進行比對，可換算出待測物的數量。

2. PCR
 2.1 傳統PCR
     藉由準確的溫度升降來擴增目標核酸序列，透過跑膠來看結果。
  2.1.1 優點：其實也沒什麼優點，不過發paper放膠圖看結果最straightforward。
  2.1.2 缺點：速度慢、要碰有毒的EtBr、照UV光、這種大體積buffer的實驗容易搞得
        bench濕答答的我不喜歡。
 2.2 Real-time PCR (Quantitative PCR)


  2.2.1 優點：可用來準確測量待測樣品的濃度。
  2.2.2 缺點：速度慢、標準品若沒稀釋好(R^2值太差)則整組實驗fail。
 2.3 快速PCR


   2.3.1.2 恆溫環形核酸增幅法(Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP)
           藉由引子於60-65℃的恆溫中將雙股DNA denature成單股DNA[2-4]。

    2.3.1.2.2 缺點：primer及probe較難設計且限制多，在非目標序列上也易有非專一性
              的擴增導致偽陽性發生[3, 5]。
   2.3.2.2 熱對流PCR
           https://i.imgur.com/hV7xLSk.jpg

           藉由分別偵測實驗前及實驗後的螢光值，利用軟體來判讀目標核酸序列的有無
           。國內也已有商業化應用此法的政府法人及業者[1, 8-10]，在前陣子許多討
           論PCR的文中屢次被提及的iiPCR即為此種之延伸。
    2.3.2.2.1 優點：相較於傳統的PCR，恆溫式的方法省去了溫度升降循環的時間，所以
              速度較快。


3. Pooling test
   https://i.imgur.com/2P6aIPb.jpg


   流程圖：
   https://i.imgur.com/9528Aev.jpg

4. 機器
   機器的部分，這種用來檢驗疾病的儀器和試劑都要取得IVD (In vitro diagnostic
   devices)認證(例如歐盟的CE-IVD)，和一般學校及研究機構實驗室使用的RUO
   (Research use only)儀器等級不同(例如Bio-Rad的CFX96 Dx有IVD認證，CFX96 Touch
   就沒有)，前者要求的精確度及容許的誤差範圍較後者嚴格許多，以公差來比喻的話



腦袋是用來在遇到問題時思考如何解決問題的
不是用來無腦盲從土法煉鋼瞎做的


Reference
1. https://reurl.cc/GmEW7G
2. https://doi.org/10.1093/nar/28.12.e63
3. https://www.cdc.gov.tw/File/Get/kOlpcBlLkvOvWHLluofgaA
4. https://www.youtube.com/watch?v=L5zi2P4lggw
5. https://doi.org/10.1186/s12936-016-1183-z
6. https://science.sciencemag.org/content/298/5594/793
7. https://doi.org/10.2144/000113589
8. https://reurl.cc/zeNxak
9. https://www.youtube.com/watch?v=DBjZ0LIEMNo (00：00~11：50)
10. https://reurl.cc/MANqpv
11. https://reurl.cc/O0vQGA


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膽欲大而心欲小 智欲圓而行欲方

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